Как считать отдельный символ за один раз из файла в Python?

Просто прочтите один символ

f.read(1)

Сам Python может помочь вам в этом, в интерактивном режиме:

>>> help(file.read)
Help on method_descriptor:

read(...)
    read([size]) -> read at most size bytes, returned as a string.

    If the size argument is negative or omitted, read until EOF is reached.
    Notice that when in non-blocking mode, less data than what was requested
    may be returned, even if no size parameter was given.

Просто:

myfile = open(filename)
onecaracter = myfile.read(1)

Вам следует попробовать f.read(1), что, безусловно, правильно и корректно.