Как отключить строку под полосой инструмента в winform c#?

Это ошибка в "системном" рендере, подробности в этом отчёте об ошибке.

Ответ Microsoft дает очень простое решение:

1) Создайте подкласс ToolStripSystemRenderer, переопределив OnRenderToolStripBorder и сделав его no-op:

public class MySR : ToolStripSystemRenderer
{
    public MySR() { }

    protected override void OnRenderToolStripBorder(ToolStripRenderEventArgs e)
    {
        //base.OnRenderToolStripBorder(e);
    }
}

2) Используйте этот рендерер для вашей инструментальной полосы:

toolStrip3.Renderer = new MySR();