В Windows для меня это работает:
virtualenv --python=c:\Python25\python.exe envname
без python.exe Я получил WindowsError: [Error 5] Access is denied У меня установлен Python2.7.1 с virtualenv 1.6.1, и мне нужен python 2.5.2.
python.exe
WindowsError: [Error 5] Access is denied